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白DsRed吸收截面光谱但是，巨幅提高每个时间和面积上可用光子数量对图像的真正影响是什么呢？一、更高的激发效率，更高的图像亮度理论上，在双光子显微镜中，图像的亮度与激发效率直接相关，而激发效率完全依赖于光子通量和荧光团的二阶非线性激发截面(GM) 。作为一个例子，我们可以尝试计算荧光蛋白mRFP在15fs激光脉宽（如SCH飞秒激光器）和1050nm中波长照射下的激发效率。与100fs的激光器相比，15fs激光器具有更宽的带宽（达200nm），可以在900到1200nm之间激发mRFP，与100fs激光器的11nm相比，这是一个更宽的光谱区域。图3：蓝色曲线：以1050nm为中心的SCH 15f ...
微小的双光子吸收截面将荧光产生限制在显微镜物镜的聚焦体积内。为了对样品中的单个光学截面进行成像，2PFM在二维扫描激发焦点并记录每个位置的荧光信号，衍射极限焦点提供最亮的荧光信号以及最高的空间分辨率。然而，只有通过自适应光学(adaptive optics, AO)才能维持在体深度的高空间分辨率，自适应光学可以测量和校正成像光穿过光异质样品时在波前积累的光学像差。AO与2PFM相结合，将校正的相位模式应用于物镜后瞳平面(back pupil plane)的激发波前，可以实现衍射极限性能，并且可以在大脑表面以下数百微米处解析突触。大脑的在体成像也需要高时间分辨率，对于大脑内的功能成像，需要亚秒级 ...
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