弹性散射光片荧光显微镜的应用摘要:FYLA汇编了一些客户的实验室设置,以帮助您创建有效的实验。本指南包含了一些致力于光子学的主要实验室的设置,讲述了FYLA在弹性散射光工作表荧光显微镜的应用。弹性散射光片荧光显微镜:LSFM中偏振和相干控制的建立:光片照明路径由一对515 nm和638 nm波长的二极管激光器和FYLA超连续光谱激光器(Iceblink)组成。激光束被扩展10次后进入显微镜。P1为半波片(HWP),控制三束光在通过圆柱透镜前的偏振(CL)、反射镜(GM)和照明物镜(OBJill)。GM在OBJill的瞳孔处扫描光束,在样品平面上产生一个旋转的光片。样品保存在一个定制的浸泡室(C ...
门控拉曼的荧光抑制方法及分类门控法属于时域法。前两种方法的主要优点是考虑了拉曼散射和荧光响应的不同时间行为。第三种方法利用了即使在不同波长下荧光也具有更宽光谱特性的事实,而拉曼发射光谱与激发波长耦合。该方法值得注意的技术包括位移激发拉曼差分光谱(SERDS)和减位移拉曼光谱,两者都需要在光谱采集之后进行额外的步骤。将传统的连续波拉曼系统转换为基于CCD光谱仪的SERDS设置只需要小小的修改,即合并两个稍微波长移位的激光激发源,通常在全宽半MAX(FWHM)时分开。一旦荧光变宽或扭曲拉曼峰,计算方法提高信噪比的能力有限。另一个缺点是,由于像素对像素灵敏度的随机变化大于实际的拉曼信号,它们可以忽略 ...
理论上证明了荧光干涉还原的概念。另一位先驱是Richard Van Duyne,他也是表面增强拉曼效应的发现者之一。1974年,Van Duyne研究小组首次通过实验证明,使用罗丹明6g染料掺杂苯样品可以抑制荧光,同时通过光电倍增管(PMT)和脉冲氩离子激光源在488nm激发下的组合来提高信噪比。1976年,Yaney使用与Van Duyne等人类似的装置,但使用不同的脉冲激发源(ps脉冲Nd:YAG, 532 nm掺钕钇铝石榴石激光器),发现TG拉曼与连续拉曼相比,在较短的激光脉冲宽度(约200 ns)下显著改善了苯中吖啶橙的三个主要拉曼波段的光谱结果。他还指出,环境光不会干扰门控拉曼光谱结 ...
间门和伴随的荧光抑制。根据图1(a)所示的工作原理,探测器仅在发射脉冲期间被激活,如图1(b)所示。图1(c)显示了门控(虚线)和连续光(连续线)工作模式之间的差异,每种模式都有一个有效的拉曼光谱。直到zui近,门控拉曼光谱仪的复杂性、尺寸和价格阻碍了它的广泛应用。过去已经使用了不同类型的探测器,例如多通道板(mcp),光倍增管(pmt)和超快速和强化电荷耦合器件(iccd),带有或没有克尔门。从本质上讲,这些设备需要探测器冷却,因此非常复杂和笨重(见表1)。自世纪之交以来,互补金属氧化物半导体(CMOS)单光子雪崩二极管(SPAD)阵列探测器已经商业化。CMOS spad具有显著减少上述缺点 ...
荧光显微镜(fluorescence microscope)泛指利用较短波长的光(激发光)照射样品,使样品受到高能量激发,产生较长波长的荧光(发射光),用来观察和分辨样品中产生荧光的物质的成分和位置。目前比较主流的荧光显微镜包括,激光共聚焦显微镜(LSCM),全内反射荧光显微镜(TIRF),双光子显微镜(TPM),多光子显微(MPM),光片照明显微成像技术(Lattice Light Sheete),结构光照明超分辨显微(SIM),光敏定位显微成像系统(PALM),随机光学重构显微成像系统(STORM)等。昊量光电为各种荧光显微镜提供各种单波长激光器、多波长合束激光器(激光引擎)、双光子用飞秒 ...
荧光成像技术具有检测灵敏度高、经济便捷、无辐射危害等优点,在生物医学领域具有广泛的应用,但受限于低的组织穿透深度。近红外二区荧光(1000-1700 nm, NIR-II)极大克服了传统荧光 (400-900 nm) 面临的强的组织吸收、散射及自发荧光干扰,在活体成像中可实现更高的组织穿透深度和空间分辨率,被视为最具潜力的下一代活体荧光影像技术。昊量光电既提供整体的近红外二区成像系统、红外二区高光谱成像系统、及红外二区多光谱成像系统,同时也提供近红外二区成像专用的深度制冷红外2区InGaAs。 ...
样品侧面激发荧光,在垂直于光片的方向上通过显微物镜和CCD来获取照明层面的荧光图像。从而实现了荧光样品的三维层析成像。光片照明技术本质上也是一种非常特殊的照明技术。但相对TIRF而言可以实现层析照明,从而实现了3D显微。光片照明技术和SIM,PALM/STORM等超分辨技术联用的非常多。昊量光电为光片照明荧光显微提供多种关键部件,包括:多波长合束激光器(激光引擎)、电动/压电显微载物台、以及光片(light sheet)显微镜模组、光纤耦合光片扫描仪、显微镜模块化快速安装框架、光片显微镜专用物镜等。 ...
荧光寿命显微成像(FLIM)作为一种评价荧光分子/探针生化环境的工具正受到人们的关注。荧光分子受激发后发光,荧光寿命量化了发光的衰减率。该特征时间不仅取决于特定的荧光团,还取决于其环境,分子相互作用影响弛豫过程并改变荧光团的寿命。荧光寿命是微环境的相对参数,不受环境吸收、样本浓度等因素影响,因此能够对生物组织环境中的 p H 值水平、离子浓度、氧分子浓度等微环境状态进行高精度检测。荧光寿命显微成像(FLIM),可以定位不同的分子及浓度分布,在生物,材料,半导体领域具有重要的应用价值。FLIM技术,可分为时域和频域技术,单点扫描技术和宽场成像技术。目前,频域宽场FLIM因其独特的成像速度,在应用 ...
制光所产生的荧光信号再被相机接收。通过移动和旋转照明图案使其覆盖样本的各个区域,并将拍摄的多幅图像用软件进行组合和重建,从而可以得到该样品的超分辨率图像。昊量光电为结构光照明超分辨显微提供多种关键部件,包括:液晶空间光调制器、DMD空间光调制器、多波长合束激光器(激光引擎)、液晶可控相位延迟器(LCVR)、高精度电动显微载物台、高速CMOS相机、高灵敏度SCMOS相机、荧光滤光片。 ...
度的情况下,荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子,在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后,发射出一个波长较短的光子。配合相应波长的荧光染料或荧光蛋白则可实现双光子荧光显微。双光子显微镜的优势在于:1. 漂白局限于焦点处:因为荧光激发只发生在物镜的焦点上,所以相对于激光共聚焦显微技术就不需要共聚焦针孔了。这样提高了光的检测,而且光漂白只发生在焦点上。焦点外的光漂白和光损伤很小。2. 提高信噪比。激发光波长和发射光波长具有很大的差别,提高了信噪比 。3. 更容易穿透标本:红外波长的光不易被细胞散射,能穿透更深的标本。 昊量光电为双光子显微、多光子显微提供各种关键部件,双光子用780nm、920 ...
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