荧光原位杂交 (fluorescence In Situ Hybridization, FISH) 是指利用荧光染料标记的，已知序列的单链核酸作为探针，通过碱基互补配对原则，与待检样品中核酸进行特异性结合，然后通过观察荧光信号，从而对样品中待检核酸进行定性，定量及定位分析。FISH 具有快速，信号强，特异性高以及可以多重染色等特点，广泛应用于产前诊断，基因组结构分析等领域。
影响 FISH 结果的因素有很多，包括样品准备和处理，显微镜，光源，荧光探针以及滤光片。FISH 通常基于荧光显微镜来观测信号，所用滤光片包括激发片，二向色镜和发射片三种。其工作原理如下图所示：
激发片: 选择透过光源的某部分波段的光，用来激发荧光探针；
二向色镜: 反射光源的光至样品，透过产生的荧光并反射激发光的散射光；
发射片: 选择透过荧光的某部分波段的光至检 测器或人眼，并完全阻挡掉激发光的杂散光。
在 FISH 实验中，滤光片带宽的大小会对 FISH 图像的对比度产生重要的影响。增加带宽会提高激发和接收效率，使接收的信号增强。但实际接收的信号中同时包含了探针的荧光信号和样品的背底噪音，带宽的增加会同时增加这两者的强度。带宽减小，虽然可以降低背底噪音的强度，但荧光信号也会随之减弱 。所以对于对比度要求很高的 FISH 实验，针对于每种具体的染料，都会存在一个zui佳的带宽，使 FISH 图像能够达到zui佳的对比度。chroma的FISH 滤光片的带宽都是根据常用的 FISH 染料做过优化，可以为用户的 FISH 实验提供zui佳的对比度的图像。
FISH 实验中的噪音主要来自三个方面：
(1) 细胞或组织的自发荧光;
(2) 试剂的自发荧光;
(3) 荧光探针的非特异性结合;
Chroma FISH 滤光片组具有以下特点:
·保证足够亮度的同时，提供zui佳的对比度；
·消除串色的影响；
a. 消除 Gold 和 Aqua 串色到 Green 通道；
b. 消除 Gold 和 Orange 串色到 Red 通道；
·对多波段滤光片组中的 DAPI 通道进行特殊处理，避免 DAPI 信号过强而将其他信号掩盖；
·多色图像叠加零漂移；
·磁控溅射镀膜，终身质保。
FISH 单波段带通滤光片组：
滤光片组 | 激发片 CWL/FWHM | 发射片 CWL/FWHM | 二向色镜 50% cut-on | FISH 探针 |
49000 | 350/50 | 460/50 | 400 | DAPI |
49028 | 395/25 | 460/50 | 425 | DAPI **用于395nm 光源 |
49301 | 405/10 | 460/36 | 425 | Spectrum Blue/ZyBlue |
49302 | 436/20 | 480/30 | 455 | Spectrum Aqua |
49303 | 495/25 | 537/29 | 515 | Spectrum Green/ZyGreen **用于有Aqua，无 Gold 时 |
49308 | 485/25 | 525/30 | 505 | Spectrum Green/ZyGreen **用于无 Aqua，有 Gold 时 |
49312 | 490/20 | 525/20 | 505 | Spectrum Green/ZyGreen **用于有 Aqua，有 Gold 时 |
49304 | 546/10 | 572/23 | 556 | SpectrumGold/ZyGold |
49305 | 546/22 | 590/33 | 565 | Spectrum Orange/ZyOange **用于无 Red 时 |
49309 | 539/21 | 576/31 | 556 | Spectrum Orange/ZyOange **用于有 Red 时 |
49306 | 580/25 | 625/30 | 600 | Spectrum Red/ZyRed **用于无 Gold，无 Orange 时 |
49310 | 592/21 | 630/30 | 610 | Spectrum Red/ZyRed **用于有 Gold，无 Orange 时 |
49311 | 599/13 | 632/28 | 612 | Spectrum Red/ZyRed **用于有 Orange 时 |
49307 | 630/20 | 667/30 | 647 | Spectrum Far Red |
49009 | 640/30 | 690/50 | 660 | Spectrum Far Red |
FISH 双波段带通滤光片组：
滤光片组 | 激发片 CWL/FWHM | 发射片 CWL/FWHM | 二向色镜 50% cut-on | FISH 探针 | |
探针1 | 探针2 | ||||
59001v2 | Multi Band 394/30 483/26 | Multi Band 443/36 527/40 | Multi Band 420 502 | DAPI | Green |
59002v2 | Multi Band 394/30 544/30 | Multi Band 462/35 590/41 | Multi Band 430 566 | DAPI | Orange |
59003v2 | Multi Band 394/30 576/30 | Multi Band 462/35 627/50 | Multi Band 442 600 | DAPI | Red |
59010 | Multi Band 490/20 585/22 | Multi Band 526/25 628/34 | Multi Band 508 605 | Green | Red |
59011 | Multi Band 480/30 560/25 | Multi Band 521/34 606/40 | Multi Band 503 585 | Green | Orange |
59012 | Multi Band 475/60 552/24 | Multi Band 515/30 597/46 | Multi Band 495 570 | Green | Orange |
59033 | Multi Band 436/20 535/25 | Multi Band 480/23 580/30 | Multi Band 462 558 | Aqua | Gold |
FISH 三波段带通滤光片组：
滤光片组 | 激发片 CWL/FWHM | 发射片 CWL/FWHM | 二向色镜 50%cut-on | FISH 探针 | ||
探针1 | 探针2 | 探针3 | ||||
69008 | Multi Band 435/22 501/20 575/24 | Multi Band 469/25 536/29 635/69 | Multi Band 453 517 595 | Aqua | Green | Red |
69011 | Multi Band 434/21 498/20 566/28 | Multi Band 468/22 530/25 610/40 | Multi Band 453 514 588 | Aqua | Green | Orange |
69013v2 | Multi Band 395/25 480/30 560/25 | Multi Band 440/31 520/35 605/41 | Multi Band 420 504 585 | DAPI | Green | Orange |
89084v2
| Multi Band Ex1 480/30 560/25
| Multi Band 440/31 520/35 605/41
| Multi Band 420 504 585
| Green | Orange | |
Multi Band Ex2 395/25 480/30 560/25
| DAPI | Green | Orange | |||
Singe Band 395/25 480/30 560/25
| DAPI | Green | Orange | |||
69015
| Multi Band 395/25 490/20 585/22
| Multi Band 450/30 525/25 627/34
| Multi Band 419 508 605
| DAPI | Green | Red |
89085
| Multi Band Ex1 490/20 585/22
| Multi Band 450/30 525/25 627/34
| Multi Band 419 508 605
| Green | Red | |
Multi Band Ex2 395/25 490/20 585/22
| Green | Red | ||||
Single Band 395/25 490/20 585/22
| DAPI | Red | ||||
FISH 三波段带通滤光片组：
滤光片组 | 激发片 CWL/FWHM | 发射片 CWL/FWHM | 二向色镜 50% cut-on | FISH 探针 | |||
探针1 | 探针2 | 探针3 | 探针4 | ||||
69014 | Multi Band 387/10 432/25 498/20 566/28 | Multi Band 468/22 530/25 610/40 | Multi Band 453 514 588 | DAPI | Aqua | Green | Orange |
产品标签：FISH, 滤光片,滤光片组 ,荧光染料 ,荧光探针,荧光原位杂交
